杀虫剂毒力测定为药物筛选或设计配方的依据。毒力测定与药效试验不同，前者测定杀虫剂于一定条件下对卫生害虫作用的强弱，多于实验室进行; 后者则指杀虫剂防制害虫效果的测定，多于野外现场进行，二者既有联系又有区别。进行毒力测定时，应使环境条件稳定，药物质量符合要求，供试虫类标准一致。供试虫类来源有二，一为采自野外，其获得较易，但虫类个体差异较大; 一为实验室养殖，其虫类个体差异虽小，所得数据亦较稳定，但需一定设备与技术。

毒力测定时，杀虫剂对昆虫的使用剂量，多以“药量/虫体重”，“药量/单位面积”或“药量/单位容积”表示;杀虫剂对昆虫的毒力多用半数致死量(LD₅₀) 或半数致死浓度(LC50)表示。LD50或LC50系根据实验室试验结果经统计学方法处理后求得。测定某药对昆虫之LD50或LC50时，其剂量或浓度等级，一般不少于4个，具体设置可根据杀虫剂性质而定，呈等差或等比数列均可。理想数列，其最低剂量或浓度所致的死亡率应低于30%，高于5%; 最高剂量或浓度所致的死亡率应高于80%，低于95%。实际工作中，可先做初步试验，有必要时再做进一步测试。初步试验方法可较粗放，一般将原药溶于丙酮内，分别用浸液法、药膜法或点滴法测知其毒力大致范围即可，不需计算出LD50或LC50值。毒力测定的方法随杀虫剂对昆虫的作用方式及测定目的而异，常用有以下几种。

胃毒毒力测定 具体方法因昆虫种类与药剂使用形式而不同，原则上应使杀虫剂随食物一起吞入昆虫消化道内，如用面粉或谷物混药饲虫，培养基混药饲虫，果面喷药饲虫等等。操作时，除使昆虫能取食到一定量药剂外，须避免胃毒以外毒杀作用。

触杀毒力测定 目的在于测定药剂通过昆虫体壁进入体内的致毒能力。测定时，可将粉状或液体药剂直接施于虫体表面，或将药剂按一定用量施布于物体表面，然后迫使供试昆虫于有药表面活动，并观察一定时间内死亡或中毒结果。具体方法又可分为： ①浸液法，为测定触杀毒力最简便方法，系将昆虫如蚊幼浸入药液，然后定时观察其死亡情况。②药膜法，系将杀虫剂用浸沾、滴液、喷雾或喷粉等法定量施布于墙壁、玻璃、滤纸或其他表面，然后放一定数量昆虫爬行其上，于规定时间内观察死亡或中毒情况。亦可根据昆虫于附药表面爬行直至中毒死亡所需时间来衡量其毒性大小。③点滴法，系将一定量药液滴于虫体指定部位，以测定其穿透表皮的致毒能力。此法按每一昆虫体重与受药量计算剂量，用药量少，准确度高，以较少昆虫测试即可获得满意结果。

熏杀毒力测定 一般用简便工具即可进行。可于各种玻璃瓶、钟罩或金属桶中，将所试虫类放入，再借气体自然下沉、抽气或压气等方式将药物气体引入容器内进行熏蒸。也可于熏蒸箱或熏蒸室中进行，箱或室的大小可视试验要求而定。

对驱避剂、绝育剂、性激素等的生物测定，因其毒力性质特殊，测试方法多根据试验昆虫行为特点与有关生理、生化作用专门设计。