消毒效果生物鉴定法 是指在实用条件下或应用试验时，通过测定有关微生物存亡以鉴定消毒效果的方法。鉴定的基本原理和注意事项与消毒剂杀菌试验相同 (见“消毒剂杀菌试验”条)，其具体方法则随物体表面、空气、皮肤、水液等处理对象而异。

物体表面消毒效果鉴定法 多用染菌样本法或自然菌采样法。染菌样本法测定时，将染菌样本放于具有代表性位置，经消毒处理后取样进行微生物学检验。大样本用灭菌棉拭沾取采样液涂抹采样; 小样本则直接投入采样液检验。自然菌采样法系利用自然环境中的细菌，以消毒前、后相邻部位采样培养结果判断消毒剂的作用。测定时，选择实物具有代表性部位，用标准规格板于表面划以采样方格， 一般为10×10cm2， 然后在方格内用棉拭涂抹采样进行培养。

空气消毒效果鉴定法 常用有气雾喷菌测定法与自然菌沉降测定法。气雾喷菌测定法多用于实验室空气消毒试验。测定时，先在密闭空间内喷以试验菌气溶胶。喷毕，待大颗粒沉降后，在消毒处理前、后分别用普通琼脂平板进行沉降采样培养。采样平板数、布放位置、暴露时间应前后统一，以便对比。自然菌沉降测定法仅用于现场消毒效果检验，测定原则与气雾喷菌法同，但仅观察消毒对空气中自然菌的杀灭情况，不另进行人工喷菌。琼脂平板沉降采样，简便易行，但无法准确计算空气中含有微生物数量。为进行较准确测定，可用定量抽气采样器。如琼脂平板撞击采样器，可使空气撞击琼脂培养基表面将细菌阻留; 液体撞击式采样器，可使空气通过采样液将微生物阻留; 滤膜采样器，使空气通过滤膜将微生物阻留等。

皮肤消毒效果鉴定法 可用涂抹采样法与手指压痕采样法。涂抹采样法即将灭菌空格板(一般内径为2×2cm²)贴于皮肤，用灭菌棉拭或纱布块沾取加有中和剂的采样液，于方格范围内涂抹采样，培养检验。消毒前、后采样部位应相邻近，以便比较。除皮肤原有自然菌外，亦可以人工污染的细菌作为观察对象。手指压痕采样法常用于外科手术泡手消毒效果的检验。测定时，消毒前、后分别将手指于含有中和剂的营养琼脂平板上轻压一下，然后比较检验结果以判断消毒效果。

水液消毒效果鉴定法 水液消毒效果的卫生细菌学主要指标为细菌总数与指标菌含量 (饮水消毒多以大肠菌群为准)。细菌总数是指1ml水样，在普通琼脂培养基中，于37℃经24h培养后所生长的菌落数。我国规定饮水的细菌总数以不超过100为合格。指标菌含量是指在1000ml水液中发现的指标菌数，对饮用水则多测大肠菌群数。常用测定方法有发酵法与滤膜法。发酵法多用于饮水中大肠菌群数测定。大肠菌群能发酵乳糖并产酸产气。测定时，准备50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨水二瓶，各加水样100ml; 另5ml同样乳糖蛋白胨水10管，各加水样10ml。将上述水样置于44℃温箱中培养24h。对产酸产气者，进一步证实是否为大肠菌群。根据大肠菌群阳性的发酵瓶及发酵管数，从专用检数表(见表)查得所求之大肠菌群数。滤膜法准确、简便，可用于各种水液的消毒效果检查。检验时，将水样滤经孔径为0.4～0.5μm的微孔滤膜。水样滤毕，将滤膜移放适宜琼脂培养基上，置温箱培养，并计数菌落。我国规定，自来水的大肠菌群数不应超过3。